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2016-12-08 06:11
蛋白？
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2016-11-29 00:03
分得不好，这个分离液质量重要，手法要好，离心机减速要平稳，正常是界限很清楚的一层。
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2016-12-08 15:33
如果手法操作好的话，应该就是分离液的问题，我昨天刚用两瓶分离液试过，一瓶效果很好分界明显，一瓶就是像...
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2016-12-09 09:17
有几个地方可以探讨一下： 1. 灌注流向：我们是下腔静脉进针，门静脉剪开。灌注液从下腔静脉进，门静脉出。下腔静脉比门静脉粗，有利于充盈。 2. 我们用的是四型胶原酶，0.1mg/ml，但是总量有200-300ml，整个消化过程将持续1个小时以上，灌注速度2-3ml/min. 3. 剪下肝脏后为何用预冷的培养基？灌注液37度，培养基4度，这个温差对细胞的刺激非常大。培养基也应预热至37度。 4. 消化成功的肝脏组织，机械分离时不需要用什么力气。镊子夹住，培养基里抖一下，细胞就能下来。然后移液枪轻轻吹打几下即可。 5. 铺板4-6小时后，换一下液。 另外附上参考文献一篇，里面有相关试剂的配置浓度。 ALDH2(E487K) mutation increases protein turnover and.pdf(1205.48k) |
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2016-12-09 19:45
有几个地方可以探讨一下： 1. 灌注流向：我们是下腔静脉进针，门静脉剪开。灌注液从下腔静脉进，门静脉出。下腔静脉比门静脉粗，有利于充盈。 2. 我们用的是四型胶原酶，0.1mg/ml，但是总量有200-300ml，整个消化过程将持续1个小时以上，灌注速度2-3ml/min. 3. 剪下肝脏后为何用预冷的培养基？灌注液37度，培养基4度，这个温差对细胞的刺激非常大。培养基也应预热至37度。 4. 消化成功的肝脏组织，机械分离时不需要用什么力气。镊子夹住，培养基里抖一下，细胞就能下来。然后移液枪轻轻吹打几下即可。 5. 铺板4-6小时后，换一下液。 另外附上参考文献一篇，里面有相关试剂的配置浓度。 ALDH2(E487K) mutation increases protein turnover and.pdf(1205.48k) |
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2016-12-02 17:08
展开引用
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2016-12-05 05:26
在肝细胞分离技术中，有哪些地方是需要十分小心注意的？
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2016-11-29 05:12
不要沉啊 望有经验的scholars给予指导!!
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2016-12-02 17:02
chenmo212003 胶原酶是sigma的，货号我得查一下，很久之前做的了。 灌注期间不需要手一直扶着，从下腔静脉进针后，用缝合线结扎，固定。 肝叶消化效果不同是灌注的问题。改变灌注方向后应该可以改善。 |
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2016-12-10 04:35
我们灌注方法也是下腔静脉进针，剪断门静脉。所有试剂都是预热或者室温状态。胶原酶选用的是sigma的C5138，灌注时间大概一刻钟就可以了，可能我们的酶浓度比较高，120ml 60mg。个人感觉没必要用棉棒按压，过程当中可以感觉肝脏明显变大变黄白。所用手术器械酒精擦拭消毒即可。Percoll密度离心之后下层细胞存活率很高。 |
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