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求助QIAGEN试剂盒提取总RNA的步骤... 已解决
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求助QIAGEN试剂盒提取总RNA的步骤
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2017-10-02 10:04
总RNA提取试剂盒步骤：样品处理：a.植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。b.动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。c.贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml裂解液。用取样器吹打混匀。d.细胞悬液：离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。e.血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml裂解液混匀。将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。2-8℃ 12000 rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul洗柱液，室温放置2分钟，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2分钟，2-8℃ 12000rpm离心2min，弃废液。向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。向吸附柱中加入600ul漂洗液，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。12000rpm离心2min，弃掉收集管，将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。将吸附柱放入新管中，向膜中央滴加50-100ulRNase freeddH2O，室温放置5min，12000rpm室温离心2min即得到RNA。
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