crispr cas9基因敲出质粒转染可以构建稳定细胞株吗..._稳转细胞株_细胞株_细胞相关_知道

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游客	收藏 \| 举报 2017-10-06 20:22 关注：245 回答：1 crispr cas9基因敲出质粒转染可以构建稳定细胞株吗... 已解决悬赏分：0 - 解决时间 2024-11-17 06:43 crispr cas9基因敲出质粒转染可以构建稳定细胞株吗

游客

举报 2017-10-09 09:53

基因敲出质粒转染可以构建稳定细胞株
一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株.另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株.
脂质体转染：在转染24小时后,消化细胞并计数.将细胞种到96孔板,保证每个孔2-3个细胞,这样才能得到单克隆.待细胞贴壁后,加入抗生素筛选.筛选时间和浓度视细胞而定.一般G418一个星期作用,嘌呤霉素2-3天.
脂质体法筛单克隆时间较长,且效率低,大概只有1%.
病毒转染：先要用包装细胞,一般为293细胞,包装出病毒,再用病毒转染目的细胞.包装病毒视不同类型的病毒而定,一般要3-5天的时间.包装好的病毒要测滴度,根据滴度决定转染目的细胞的病毒量.转染目的细胞1-2天后加抗生素筛选得到稳定细胞株.
病毒转染得到稳定细胞株的效率高,只是步骤繁琐.