• 游客
收藏 | 举报 2016-01-15 17:11   关注:270   回答:8

稳转细胞株的筛选...

已解决 悬赏分:0 - 解决时间 2024-12-22 10:49
稳转细胞株的筛选

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  • 游客
举报 2016-01-23 13:45
质粒转染后质粒会有某种抗性,直接相应的抗生素筛选即可
  • 游客
举报 2016-01-18 13:43
yizhe2011
质粒转染后质粒会有某种抗性,直接相应的抗生素筛选即可

谢谢回复
可能我没说清楚,我是lipo3000转染,G418筛选,G418筛选浓度已摸索出
但是在筛选过程中阴性细胞会掺杂,我想知道大家都是怎么筛选的,具体的有限稀释法又是怎么做的?
谢谢!
  • 游客
举报 2016-01-21 00:19
你细胞数少一点,成单个的克隆,然后挑选单克隆细胞扩大培养你,这样就纯了
  • 游客
举报 2016-01-16 11:51
yizhe2011
你细胞数少一点,成单个的克隆,然后挑选单克隆细胞扩大培养你,这样就纯了

谢谢您的回复,扩大培养的话,您一般怎么做,会不会细胞长不起来?
  • 游客
举报 2016-01-19 09:46
l小呆
谢谢您的回复,扩大培养的话,您一般怎么做,会不会细胞长不起来?
就是时间的问题,张久一点可以的
  • 游客
举报 2016-01-17 09:45
不如直接用慢病毒转。。。转上去的几乎都是稳定株。。。普通的质粒转染,整合效率极低,并且筛选周期超级长。。。等单克隆长出来都差不多1个多月了
  • 游客
举报 2016-01-15 17:21
kangaroo0513
不如直接用慢病毒转。。。转上去的几乎都是稳定株。。。普通的质粒转染,整合效率极低,并且筛选周期超级长。。。等单克隆长出来都差不多1个多月了

谢谢您的回复,慢病毒暂时没条件做,只能脂质体转染。
  • 游客
举报 2016-01-26 06:04
l小呆

谢谢您的回复,慢病毒暂时没条件做,只能脂质体转染。

那就用piggybac转座子系统,通过脂质体稳转。。这个做稳转株效率比直接转染高得多的多的多。