【讨论】关于重组蛋白生产用的细胞株构建与培养工艺开发..._常规细胞株_细胞株_细胞相关_知道

游客	收藏 \| 举报 2013-09-21 11:06 关注：224 回答：37 【讨论】关于重组蛋白生产用的细胞株构建与培养工艺开发... 已解决悬赏分：0 - 解决时间 2024-12-22 10:27 【讨论】关于重组蛋白生产用的细胞株构建与培养工艺开发

游客

举报 2013-09-29 06:47

horizon801 wrote:
经战友同意，将交流内容贴出
你好，请问关于稳定细胞株所用载体问题：
1、现在GS载体是否具有比DHFR有优势，相关专利大约什么时候到期？
GS相对DHFR而言具有以下几点优势：
1，细胞株筛选时间短，不需要不断的加压筛选。
2，在细胞株稳定性问题上，GS系统要更加稳定，一般稳定性培养都要做到3个月左右时间。
GS的专利好像还没有到期，DHFR的专利到期了。现在的筛选系统趋向于GS和DHFR双筛选系统，目的是集合两种优点，但效果还不确定。
2、稳定细胞株在使用过程中的产量衰减问题是如何解决的，用大量的稳定细胞株长期加压筛选？
细胞株克隆不稳定主要是克隆选择不好或筛选系统不好，主要偏向于前者。细胞株稳定性一般培养到两个月以后降低15%左右还是可以接受的
3、如果采用定点整合载体，如何选择？
这种方法目前常规用的可能比较少，在这方面没有经验的。一般GS或DHFR系统筛选到高表达细胞株克隆的概率是5%左右.

游客

举报 2013-09-26 07:44

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horizon801
经战友同意，公开问题：
您好，我看了您的几个帖子，觉得您非常厉害，很是佩服。因为面临毕业找工作处于迷茫期，因此想请教您几个问题：
1. 我14年硕士毕业，生物化学与分子生物学，女生。不知道我这种情况适不适合去工厂的细胞培养，主要是我是女生，觉得大型反应器应该是男生比较擅长。可能女生没有什么升职的空间。
2. 在生物制药中有很多的环节，比如细胞，蛋白表达，纯化，您觉得做哪种工作更容易受到重视呢或更容易受到提拔（10年以后可以进入高层）
3. 是去外企还是国内大企业还是去小企业比较好？我想象中大企业只能接触到某一小部分，小企业是不是可以学到更多的东西，不知道对不对。
很期待您的解答，您的解答决定着小女子的方向。谢谢您。期待。。。。

......

1、可以出国读博士，毕业先到美国小的生物公司先做做
2、国内做培养、发酵研发可以去公司的研发机构，大型反应器如果您不是女汉子，就别去。
3、生物制药目前缺的是那种国际化的、有工作能力的年轻人，提高表达量、提高纯化收率、等给公司带来明确效益的，还有分析方法开发的人员比较抢手。
4、去合资和外企，对于研发来讲比较好，如果你是一个事业型的女孩子，如果你满足于生活的悠闲，可以去研究所，据我所知，研究所往往没有生产型企业的研发搞的更实用，往往偏理论
5、小企业或者是发展中的企业可以学习到很多，国外大企业也好，钱多，范围窄，适合没有太多追求的女孩子

游客	举报 2013-10-02 12:27 心朗朗各位大侠，我请教个很基础的问题（我主要做行政管理这一块），公司细胞培养这块的同事，每天去看发酵罐的次数也就2-3次，这个频率是不是少了点？而且主要的是细胞还养得不怎么样。呵呵，看的次数多少和细胞养的好坏没有必然联系的所以做管理的不要从看发酵罐的次数来做判断，看的次数多少和你的管理工作没有关系，可以随他去细胞养得好不好才是你该关心的事情，养得不好可以说，可以提，但是不能从看多少次发酵罐来入手

游客	举报 2013-09-28 04:30 1、关于乳酸的控制控制有哪些比较好的策略，根据以往的经验就是就是降低糖浓度，结果是有的时候管用有的时候不管用，对于下面的工艺开发就比较头疼了。 2、能否推荐一下关于反应器及工艺优化方面的介绍书籍，增加自己对这方面认识。再次谢谢您

游客

举报 2013-09-23 18:15

1.我个人的经验的，反应器产量有了过程参数的精确控制（pH/DO/temp），流加方案的优化，关键代谢指标的控制（糖、乳酸、谷氨酰胺、氨），应该有较大幅度的提高（30%），当然这个是case by case的，不能一概而论，更多的依赖于细胞株潜力和平台化的培养工艺开发效率。
2、培养基优化的常规方法与思路（参考《用于重组抗体生产的细胞大规模培养工艺开发》）
3、不仅大豆水解物，还有小麦水解物，酵母水解物，肯定是要淘汰的。这些添加物本身成分不明确，质量不可控。培养基的发展方向是CD，即化学成分明晰。
4、目前国内新上项目应该在2g/L左右。如果不考虑具体的品种，市场容量对产能的要求。个人感觉4g/L没有必要。重组抗体的产业化工艺开发不仅是细胞培养这一个环节。TITER过高对于下游的压力。对于产品质量的影响，都应该考虑。

版主zhulikou431留言:
加分鼓励。

游客

举报 2013-09-27 08:48

1）控制乳酸，
首先应考虑葡糖糖的限制性流加策略，即根据细胞的葡萄糖消耗速率进行培养基流加。考虑到葡萄糖浓度控制过低（<1g/L）时，培养基中其他营养成分可能消耗殆尽，一般残糖的控制水平可以控制在2-5g/L左右。
目前商品化的培养基及流加策略，都有可供参考的protocal，可以直接在此基础上进行工艺优化。
文献中报道的乳酸阈值（影响细胞生长、抗体质量的乳酸浓度）58mM，l流加培养操作模式下，一般很少能达到。
其次，细胞培养工艺中pH的控制，对乳酸的生成也有影响。一般情况下，pH控制高，即偏碱的环境是刺激细胞产酸的。所以一般表达重组蛋白的培养工艺中，生产期的pH要控制的偏酸性。
最后，溶氧不足也会造成细胞无氧呼吸，代谢产酸的。
至于报道的使用半乳糖替代葡萄糖，不做推荐。
2）细胞培养的参考书籍
推荐hu weishou 《Cell Culture Technology for Pharmaceutical and Cell-Based Therapies》google可以查到免费电子版本。

游客	举报 2013-10-02 21:58 不错，学习了

游客	举报 2013-09-30 11:00 学习了！另外询问一个问题，反应器中溶氧不足是培养过程中某个特定阶段的问题呢，还是会伴随整个培养过程一直出现？

游客	举报 2013-09-23 03:12 horizon801 2）细胞培养的参考书籍推荐hu weishou 《Cell Culture Technology for Pharmaceutical and Cell-Based Therapies》google可以查到免费电子版本。胡教授的书推荐，听过胡教授的讲座，很有价值~

游客	举报 2013-09-28 09:10 horizon801 2）细胞培养的参考书籍推荐hu weishou 《Cell Culture Technology for Pharmaceutical and Cell-Based Therapies》google可以查到免费电子版本。胡教授的书推荐，听过胡教授的讲座，很有价值~

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