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收藏 | 举报 2017-09-29 17:42   关注:170   回答:1

胶回收试剂盒和PCR回收试剂盒的区别...

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胶回收试剂盒和PCR回收试剂盒的区别

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  • 游客
举报 2017-10-09 15:56
如果确定PCR产物很纯(没有引物二聚体),完全可以用PCR产物纯化试剂盒。
如果PCR产物不是很纯,或者PCR扩增条带比较小,PCR产物前面又有较多引物二聚体时,用胶回收,其余用PCR产物纯化试剂盒。
pcr纯化试剂盒和胶回收试剂盒的区别:
PCR纯化试剂盒:是直接水溶解的PAC产物就可以回收,回收效率高,但是只适合单一条带需要纯化测序的时候使用。
PCR凝胶试剂盒:是在PCR产物是混合物,有多条杂带的情况下,先跑胶将杂带分离,然后在将所要的条带位置的胶切下回收,后者的回收效率低,但是很纯净。
胶回收试剂盒操作步骤:
配制琼脂糖EB凝胶,电泳以分离DNA片段。任何类型或等级的琼脂糖都可以使用。
电泳足够时间后,在紫外灯下小心地把所需的DNA的片段切下来。并尽量去除多余的凝胶。
称取空离心管的重量,切下带目的片段的凝胶装在1.5ml离心管中并称其重量,求出凝胶块的重量,近似地确定其体积。一般情况下,凝胶的密度为1g/ml,于是凝胶的体积与重量的关系可按下面换算:凝胶薄片的重量为0.2g 则其体积为0.2ml;加入等倍凝胶体积的Binding Buffer,把混合物置于55℃~65℃水浴中温浴7min至凝胶完全融化,其间每隔2-3分钟混匀一次;
转移700μl的DNA-琼脂糖溶液到一个HiBindTM DNA柱子,并把柱子装在一个干净的2ml收集管内,室温下,10,000×g离心1min,弃去液体。
将柱子重新套回收集管中,加300μl Binding Buffer至HiBind DNA 柱子中;室温下,10,000×g离心 1分钟,去弃滤出液;这一步相当关键,不要忽略此步。
将柱子重新套回收集管中,加入700μl SPW Wash buffer至HiBind DNA柱子中,室温下,10,000×g离心1分钟,去弃滤出液;注:SPW Wash buffer在使用前必须按瓶子标鉴要求用无水乙醇进行稀释。
将柱子重新套回收集管中,重复加入700μl SPW Wash buffer至HiBind DNA柱子中,室温下,10,000×g离心1分钟,去弃滤出液;
弃去液体,将空柱子重新套回收集管中,10,000×g离心1min以甩干柱基质残余的液体。
这步可以去除柱子基质上残余的乙醇,不要省略此步―――对得到好的DNA产量是十分重要的。
把柱子装在一个干净的1.5ml离心管上,加入30~50μl洗脱液或灭菌水上柱子膜上,10,000×g离心1分钟,离心管中的溶液就是纯化的DNA产物,保存于-20度。