【求助】**大侠指教降钙素原电化学发光法的详细操作步骤..._链霉亲和素结合物_其他免疫产品_抗体类_知道

电化学发光（ECL）是源于电化学法和化学发光法，但又不等同于它们的一种新型的分析方法，是发生在电极表面由稳定的前体产生的具有高度反应性的化学发光反应。发光反应发生在阳极表面 3nm 的激发区内。其化学发光基于三氯联吡啶钌 [Ru （ bpy ） 32+ ] 络合物和三丙胺（ TPA ·）两种电化学活性底物在反应中引起的光子发射。在工作电极上加一定的电压能量作用下，二价的三氯联吡啶钌 [Ru （ bpy ） 32+] 发生氧化反应释放电子而成为三价的三氯联吡啶钌 [Ru （ bpy ） 32+] ，与此同时，反应体系中的 TPA ·也在电极表面发生氧化而成为阳离子自由基 TPA+ ，并迅速自发脱去一个质子而形成自由基 TPA ·。由于 [Ru （ bpy ） 32+] 是强氧化剂而 TPA ·是强还原剂，两者即发生氧化还原反应，其结果使 [Ru （ bpy ） 32+] 还原成激发态的 [Ru （ bpy ） 32+] ，其能量来源于 [Ru （ bpy ） 32+] 与 TPA ·之间的电势差，激发态 [Ru （ bpy ） 32+] 以荧光机制衰变并同时释放出一个波长为 62Onm 的光子，而成为基态的 [Ru （ bpy ） 32+] 并继续参与发生在电极表面的化学发光反应，使电极表面的氧化还原反应循环进行，测定信号不断的放大，从而使检测灵敏度大大提高。
　　在电化学发光反应中，其免疫反应或核酸分析的特异性取决于钌标记的免疫物或核酸探针和 PCR 的引物。常用的钉标记物是 [Ru （ bpy ） 32+] 。 [Ru （ bpy ） 32+] 的盐是很稳定的水溶性化合物，在 -10 ℃至 -30 ℃可稳定 18 个月，经化学修饰后形成 N 羟基琥珀酰胺（ NHS ）酯或磷酞胺化合物。能与蛋白质赖氨酸的ε - 氨基或核酸上的氨基形成稳定的酰胺键。
　　ECL 分析仪的核心系统为 ECL 测量室，它被设计成为一个化学流动室，具备分离结合物和游离物，发生 ECL 反应，清洗测定系统的功能。分离系统采用磁性微球包被链霉亲和素捕获方法，利用生物素棗链霉亲和素的牢固结合力（ KD=1014 ，免疫放大能力和反系统中的磁分离功能，使兔疫反应或核酸反应在磁性微球表面快速进行，结合相和游离相得到有效分离，并使结合相聚集在工作电极表面 3nm 的激发区内，有利于 ECL 的反应并提高了反应灵敏度。 ECL 反应通过在工作电极和参比电极之间加一触发电压而启动。当触发电压以 750mV ／ S 上升至 565mV ～ 1000mV 时， TPA ·在电极表面发生氧化和水解，产生离子的定向流动而形成微弱的电流，当触发电压达到 1100mV 时， [Ru （ bpy ） 32+] 开始被氧化形成 [Ru （ bpy ） 32+] ，发生 ECL 。反应迅速释放出光子，通过光电倍增管测量 ECL 的照光度。清洗系统采用碱性溶液去除电极表面的蛋白质，并在电极同加一高电压，诱发氢氧化物形成，该物质可以擦亮电极，除去电极表面的任何微粒和氧化物等。

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