【交流】单抗讨论小组话题七:抗原的设计与合成——小分子药物单..._小分子_生物分子_生化试剂_知道

游客	收藏 \| 举报 2007-11-01 22:04 关注：238 回答：3 【交流】单抗讨论小组话题七:抗原的设计与合成——小分子药物单... 已解决悬赏分：0 - 解决时间 2024-11-16 08:22 【交流】单抗讨论小组话题七:抗原的设计与合成——小分子药物单克隆抗体制备的关键[精华]

游客

举报 2007-11-12 22:49

呵呵，楼主是这方面的专家，转载相关资料，供大家交流

为产生有效的抗体，第一步是设计好的抗原，此抗原可以来源于整个蛋白质的一部分：一个或几抗原决定簇区域的序列。

（1）什么是抗原决定簇？
蛋白质表面部分可以使免疫系统产生抗体的区域叫抗原决定簇。一般抗原决定簇是由6－12 氨基酸或碳水基团组成，它可以是由连续序列（蛋白质一级结构）组成或由不连续的蛋白质三维结构组成。

（2）选择抗原决定簇
为选择好的抗原决定簇，应符合以下三点：
1．亲水性：大部分抗原决定簇是亲水性的；
2．处于结构表面：大部分抗体只与蛋白质表面部分结合；
3．有弹性：许多已知的抗原决定簇是在自由活动区域。所以一般来说蛋白质的N 端及C 端是很好的抗原决定簇区域。

（3）抗原性与免疫原性
单独的抗原决定簇是不能产生免疫反应，它只有抗原性但没有免疫原性，为使它能具有免疫原性，它必须偶联在载体蛋白上。

（4）抗原决定簇的预测
对每个氨基酸的表面可接触性(Surface Accessibility)、亲水性(Hydrophilicity)和弹性(flexibility)进行计算可以大体推算出抗原决定簇区域，抗原决定簇区域应综合以上三个特点。目前市面上有几个专业测定软件满足需要：如MacVestor , Protean , GCG 等。

（5）设计合成多肽
一旦抗原序列决定后，接下来就是设计所需合成的多肽了，设计时除了注意其序列外，同时应考虑一些产生免疫机制问题，如：

1．载体蛋白的接入位置；
2．如果其序列是位于蛋白C 端的，此多肽C 端一定是自由的羧基团，而N 端被掩盖。同时如果载体蛋白是通过半胱氨酸偶联，此半胱氨酸应处于N 端位置，使C 端完全暴露给免疫系统。

3．相反，如果其序列是位于蛋白质N 端，此多肽C 端应掩盖，暴露出N端，而载体蛋白应在C 端。

（6） T 细胞抗原决定簇
不是所有多肽序列是用来直接产生抗体的，特别是一些序列短、并通过多抗原肽系统获得的免疫原性的肽。而这些是通过T 辅助细胞抗原决定簇来产生免疫。一个T 辅助细胞抗原决定簇多肽序列可以增强B 细胞产生抗体能力，但是又是由其遗传背景所决定的，设计此类多肽必须知道其抗原决定簇和被免疫动物的遗传背景。

游客

举报 2007-11-01 23:22

合成的人工抗原免疫原性受到多种因素的影响，设计时需要考虑主要因素包括载体蛋白的性质、半抗原的分子空间结构、间隔臂的长度和分子结合比。
常用的载体蛋白有牛血清白蛋白（BSA）、鸡卵清蛋白（OVA）、钥孔血蓝蛋白（KLH）、人血清白蛋白（HSA）、兔血清白蛋白（RSA）及人工合成的多聚赖氨酸（PLL）等，较多选用BSA作载体蛋白，原因是BSA理化性质稳定，不易变性，价廉易得，分子内含自由氨基多，在较大pH值范围和不同离子强度下均能保持较大的溶解度，更有利于偶联反应的进行。
Thomas报道，人工抗原的免疫原性与半抗原分子空间结构的复杂程度呈正相关，含有芳香结构的半抗原偶联成功率为33%，不含芳香结构的半抗原偶联成功率仅有9%.
Sionf等认为，一定长度的间隔臂的介入，有助于半抗原结构的暴露，有利于特异性抗体的产生，间隔臂过长可形成新的抗原表位，易被细胞识别而产生“桥抗体”，间隔臂过短则载体蛋白的空间位阻将影响细胞对半抗原的识别，不产生特异性抗体，最好的间隔臂是3～6个直链碳，长度以5～8Å为宜，以－N＝N－作间隔臂，长度适宜，既可产生特异性抗体，又避免了桥抗体的出现。
关于半抗原与载体蛋白的最佳分子结合比目前尚未形成定论，Eilange]提出最佳分子结合比为5～25∶1，Schneider等提出以10～20∶1为好，吴松如等认为以3～45∶1为好。
个人认为，不同半抗原其分子构象、电子分布、结构复杂性、基团极性、亲水性或疏水性等性质不同，最佳分子结合比也不尽相同。不同的结合比的合成抗原，可以通过调节不同的免疫剂量得到较佳的免疫效果。

游客	举报 2007-11-03 04:38 请教：其中“ε结合物”你怎么得来，是否冻干，定量溶解，然后求ε？ ε=A/C(A:吸光度;C:摩尔浓度) 结合物就是合成的完全抗原,通常在合成好之后就用考马斯亮蓝测其浓度,然后经紫外扫描得到吸光度,二者比值即为ε. 冻干后再定量溶解也可以,但一般合成好之后抗原都为溶液,考马斯亮蓝测蛋白浓度更为简便一些.

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