经典的底物耗尽 [病例帖]..._反应底物_生物分子_生化试剂_知道

游客	收藏 \| 举报 2016-03-10 19:44 关注：244 回答：3 经典的底物耗尽 [病例帖]... 已解决悬赏分：0 - 解决时间 2024-12-22 10:01 经典的底物耗尽 [病例帖]

游客

举报 2016-03-22 05:37

最近终于明白了

只有在零级反应期，单位时间内的吸光度变化值才与反应速率成正比

正常应该是上图这样，吸光度读数点均在零级反应期内

当样本中酶的活性超过试剂盒提供的线性范围时，零级反应期非常短，不能有效的完成速率法检测，此为底物耗尽。常见的有三种情况：

1、样本中酶的活性远超线性范围，底物几乎是瞬间被耗尽，零级反应期极短，设定的常规吸光度读数点完全不在零级反应期内，即反应界限内的吸光度点数零，此时甚至可能会测出负值（很容易就能发现）；

2、样本中酶的活性超过线性范围较多，底物在较短时间内是被耗尽，零级反应期较短，设定的常规吸光度读数点大部分不在零级反应期内，此时会造成结果严重偏低（不易发现，故可能导致严重后果）；

如下图，红色区域是读数点，吸光度读数点完全不在零级反应期内

3、样本中酶的活性超过线性范围并不多，底物耗尽需要相当的时间，零级反应期相对上述两种情况要长，设定的常规吸光度读数点仅有小部分不在零级反应期内，此时依然会造成结果偏低但没有2那么严重（不易发现，也不会太严重）。

不知道我说的对不对？

游客

举报 2016-03-19 22:22

技术贴，顶！d=====(￣▽￣*)b

感觉楼主的两个酶线性范围有点小啊！从楼主后两张图片看来，ALT的线性估计只在两百多些，AST的线性在500左右。谷丙ALT500不到和谷草AST1000左右就不行了，按照说明书给定的各项参数，两者的线性范围一般都在800以上，正常情况下即使在这两个值附近都是可以勉强得出结果的（未设定读点前移或者弹性速率啥的），如果机器的线性范围达不到说明书给定的范围，就要注意仪器参数设定有没有问题或者试剂质量有没有问题。正常情况下，两个酶的参数中样本与试剂体积比都在1:10左右，如果样本用量增大会缩小整个反应的线性范围，好处是低值结果重复性会很好，不利的地方就是遇到特高值标本在没有设定弹性速率时容易漏掉，造成误判。楼主可以先核对试剂说明书与上机参数间有没有较大的出入。

游客	举报 2016-03-19 07:48 南方雨对了，胆汁酸的结果是多少？要是酶胆分离就更好了酶胆分离，是酶跟胆红素不同步升高，胆红素升高而上述两个酶是真正的处于低值。是在重症肝炎时肝细胞大量坏死，产生或者释放转氨酶的能力完全枯竭，而此时胆红素则直线上升。不是本例中的过高导致的底物耗尽的情况。

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